Estabilidade dos sistemas tampão bicarbonato e HEPES de vários meios de cultura comerciais: efeitos da concentração de CO2 e do equipamento. Trabalho apresentado no VIII Congresso Brasileiro de Reprodução Assistida, Belo Horizonte, Agosto 2004.

Estabilidade dos sistemas tampão bicarbonato e HEPES de vários meios de cultura comerciais: efeitos da concentração de CO2 e do equipamento.

Alecsandra do Prado Gomes, Sidney Verza Jr & Sandro Esteves

Objetivo: Avaliar a estabilidade dos sistemas tampão bicarbonato e HEPES de diversos meios de cultura existentes no mercado, expostos a diferentes concentrações de CO2 em incubadoras distintas.

Materiais e Método: Estudo experimental simulando as fases da cultura embrionária com meios de cultura comerciais, expostos a diferentes concentrações de CO2. Os experimentos foram realizados em duplicata utilizando incubadoras distintas, uma delas equipada com sensor de umidade e múltiplas portas internas (ThermoForma modelo 3110 serie II), e outra sem sensor de umidade e com 3 portas internas (Forma Scientific modelo 3546). Utilizou-se diferentes concentrações de CO2: 5,0%, 5,5%, 6,0%. Para cada experimento, meios de cultura provenientes de diferentes fornecedores, 1)Vitrolife, Suécia: Asp, gamete, IVF; 2) Cook, EUA: sperm buffer, follicle flushing, oocyte wash, fertilization e cleavage; 3) Irvine Scientific, EUA: HTF e HTF modificado, foram incubados em condições ideiais de cultura por um período de 12 horas, a 37°C. As aferições do pH foram realizadas consecutivamente em intervalos de 2,5 minutos, sendo o ponto de partida a remoção do meio da incubadora (tempo 0), utilizando pHâmetro de bancada calibrado e aferido(Digimed, Brasil).Valores de pH dos diversos meios, sob diferentes concentrações de CO2, foram comparados. Avaliou-se também as variações do pH de um mesmo meio, sob a mesma concentração de CO2, em incubadoras distintas. Dados foram analisados por ANOVA e Student¢s t-test, com p<0,05 considerado significante.

Resultados: Não houve diferença significativa do pH dos meios com tampão bicarbonato e HEPES entre as 2 incubadoras, nem variação significativa do pH destes meios na faixa de concentração de CO2 estudada. Após remoção da incubadora, observou-se elevação significativa do pH dos meios com tampão bicarbonato tempo-dependente, não atenuada pela exposição prévia a concentrações de CO2 mais elevadas. O tempo máximo de exposição ao ar ambiente destes sistemas deve ser de 2,5 minutos. Os meios de cultura tamponados com HEPES da Cook e Irvine apresentam estabilidade significativamente superior aos da Vitrolife, quando expostos ao ar ambiente.

Conclusão: Meios com tampão-bicarbonato de diferentes fornecedores apresentaram capacidade tampão semelhante, quando expostos a diferentes concentrações de CO2 . Não parece haver variação inter-equipamento na manutenção da estabilidade do pH. A capacidade tamponante dos meios com HEPES variam de acordo com o fornecedor, sendo importante que cada laboratório faça a caracterização do seu sistema de cultura, o que permite o entender as limitações dos mesmos, auxiliando para minimizar os danos iatrogênicos durante a manipulação de gametas e embriões.